Санація перещеплюваних ліній клітин від мікоплазменної інфекції

Автор(и)

  • S.G. Tashuta State Scientific Control Institute of Biotechnology and Strains of Microorganisms , Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів
  • G.S. Kuzmych State Scientific Control Institute of Biotechnology and Strains of Microorganisms , Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів
  • O.S. Vatlitsova State Scientific Control Institute of Biotechnology and Strains of Microorganisms , Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів
  • Z.S. Klestova State Scientific Control Institute of Biotechnology and Strains of Microorganisms , Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів

DOI:

https://doi.org/10.31548/dopovidi2020.05.010

Ключові слова:

деконтамінація, санація, мікоплазми, ципрофлоксацин, культура клітин, ПЛР

Анотація

У статті наведено результати  експериментальних досліджень з деконтамінації  12 перещеплюваних культур клітин тваринного походження від мікоплазм. Була визначена оптимальна допустима концентрація препарату ципрофлоксацин, який використовувався авторами для санації культур клітин від мікоплазм. Експериментально встановлено, що цей препарат, в концентрації 20 мкг/см3 в повній мірі пригнічує розмноження та життєвий цикл мікоплазм та при цьому не викликав суттєвого впливу на самі клітини. Така концентація ципрофлоксацину додавалась в ростове та підтримуюче середовища протягом п’яти послідовних пасажів до контамінованих мікоплазмами культур клітин. Після формування в культуральному посуді клітинного моношару, він завжди піддавався ретельному  п’ятикратному  промиванню розчином Хенкса, а лише потім замінювалось середовище на підтримуюче. Таким чином, повний цикл санації культур клітин, з моменту висіву клітин в культуральний посуд і до наступного пересіву клітин займав 3-4 доби. З кожною ураженою мікоплазмами культурою клітин проводили від 2 до 5 тактх циклів. По завершені санації зразки надосадової культуральної  рідини з кожної лінії культур клітин відбирали та досліджували методом ПЛР на наявність в них мікоплазм.  Мікоплазменна інфекція після проведеної санації культур клітин була виявлена лише в одному зразку. Ефективність методу складає  88,9%.  Таким чином, препарат  ципрофлоксацин можна з успіхом використовувати для деконтамінації культур клітин у наукових і виробничих вірусологічних лабораторіях.

Посилання

Nochevny V.T., Novokhatsky A.S., Karpukhina O.G. (2002). Prevention and methods of cell culture decontamination from bacteria and mycoplasmas using fluoroquinolones (review). Cell cultures. Newsletter. Issue. 17. SPb., P. 9-15 [in Russian].

Radaeva I.F., Kutserubova N.S., Sementsova A.O., Trifonova K.E., Bogryantseva M.P., Usova S.V., Nechaeva E.A. (2018). Detection and decontamination of mycoplasma infection in human cell culture lines. Bulletin of Biotechnology and Physical and Chemical Biology named by Yu.A. Ovchinnikova. Scientific and Practical Journal Vol. 14, № 2, P. 17-22 [in Russian].

Shalunova N.V., Volkova R.A., Volgin A.R., Petruchuk E.M., Berdnikova Z.E., Elbert E.V., Shevtsov V.A., Rukavishnikov A.V., Semenova I.S., Merkulova O.V., Trusov G.A., Tereshkina N.V., Rachinskaj O.A., Indikova I.N., Lebedinskaya E.V., Mytsa E.D. (2016). Mycoplasma - contamination of cell cultures. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment.;16(3):151-160 [in Russian].

Drexler H.G., Uphoff C.C. (2000). Contamination of cell culture, Mycoplasma. Encyclopedia of cell technology. Ed. by R.S. Spier. N.Y.; Toronto, Vol. 1. P. 609-627.

Drexler H.G., Uphoff C.C., Dirks W.G., MacLeod R.A.F. (2002). Mixups and mycoplasma: The enemies within. Leukemia Res. 26. P. 329-333.

https://doi.org/10.1016/S0145-2126(01)00136-9

Harasawa R., Uemori Т., Asada K., Kato I. (1993). Sensitive detection of mycoplasmas in cell cultures by using two-step polymerase chain reaction // Rapid diagnosis of mycoplasmas / Eds. I. Kahane, A.Adoni. N.Y.; London, P. 227-232.

https://doi.org/10.1007/978-1-4615-2478-6_16

Hay R.J., Macy M.L., Chen T.R. (1989). Mycoplasma infection of cultured cells. Nature. 339. P. 487-488.

https://doi.org/10.1038/339487a0

Langdon S.P. (2004). Cell culture contamination: an overview. Methods Mol. Med. Vol. 88. P. 309-317.

https://doi.org/10.1385/1-59259-406-9:309

Uphoff C.C., Drexler H.G. (1999). Detection of mycoplasma contamination in cell cultures by PCR analysis. Human Cell. 12: P. 229-236.

Uphoff C.C., Drexler H.G. (2002). Comparative PCR analysis for detection of mycoplasma infections in continuous cell lines. Vitro Cell Dev Biol Anim. 38: P. 79-85.

https://doi.org/10.1290/1071-2690(2002)038<0079:CPAFDO>2.0.CO;2

Uphoff C.C., Drexler H.G. (2002). Comparative antibiotic eradication of mycoplasma infections from continuous cell lines. Vitro Cell Dev Biol Anim.38: P. 86-89.

https://doi.org/10.1290/1071-2690(2002)038<0086:CAEOMI>2.0.CO;2

Uphoff, C. C., & Drexler, H. G. (2014). Detection of Mycoplasma Contamination in Cell Cultures. Current Protocols in Molecular Biology, 106, P. 28.4.1 - 28.4.14.

https://doi.org/10.1002/0471142727.mb2804s106

Uphoff, C. C., & Drexler, H. G. (2014). Eradication of Mycoplasma Contaminations from Cell Cultures. Current Protocols in Molecular Biology, 106, P. 28.5.1-28.5.12.

https://doi.org/10.1002/0471142727.mb2805s106

Young, L., Sung, J., Stacey, G., Masters, J. R. (2010). Detection of Mycoplasma in cell cultures. Nature Protocols, 5(5), P. 929-934.

https://doi.org/10.1038/nprot.2010.43

Завантаження

Додаткові файли

Опубліковано

2020-10-26

Номер

№ 5(87) (2020)

Розділ

Ветеринарна медицина, якість і безпека продукції тваринництва

Ліцензія

Стосунки між правовласниками і користувачами регулюються на умовах ліцензії Creative Commons Із Зазначенням Авторства – Некомерційна – Поширення На Тих Самих Умовах 4.0 Міжнародна (CC BY-NC-SA 4.0):https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/deed.uk

Автори, які публікуються у цьому журналі, погоджуються з наступними умовами:

  • Автори залишають за собою право на авторство своєї роботи та передають журналу право першої публікації цієї роботи на умовах ліцензії Creative Commons Attribution License, котра дозволяє іншим особам вільно розповсюджувати опубліковану роботу з обов'язковим посиланням на авторів оригінальної роботи та першу публікацію роботи у цьому журналі.
  • Автори мають право укладати самостійні додаткові угоди щодо неексклюзивного розповсюдження роботи у тому вигляді, в якому вона була опублікована цим журналом (наприклад, розміщувати роботу в електронному сховищі установи або публікувати у складі монографії), за умови збереження посилання на першу публікацію роботи у цьому журналі.
  • Політика журналу дозволяє і заохочує розміщення авторами в мережі Інтернет (наприклад, у сховищах установ або на особистих веб-сайтах) рукопису роботи, як до подання цього рукопису до редакції, так і під час його редакційного опрацювання, оскільки це сприяє виникненню продуктивної наукової дискусії та позитивно позначається на оперативності та динаміці цитування опублікованої роботи (див.The Effect of Open Access).